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快速學會使用熒光顯微鏡的方法




來源:責任編輯:yiyi
時間:2011-6-13 9:48:01

快速學會使用熒光顯微鏡的方法

有的朋友在使用熒光顯微鏡時候,由于沒有弄懂原理,就盲目的去試驗,較后找不到問題出在哪里因而變得沮喪,所以我在這里給大家講一下原理,以后大家遇到熒光顯微鏡的問題就可以觸類旁通了

先了解一下熒光的原理和性質,然后才能確認一下要使用的激發塊的類型。
1、熒光原理是用短波長的光去激發標本,標本產生長波長的熒光。在光譜上,345nm是近紫外光(肉眼看不見),461nm是藍色光,530nm是綠色光。

2、你染細胞核的DAPI染料應該用激發波長359nm的近紫外光去激發,選擇吸收波長461nm的濾色鏡去觀察藍色熒光。

3、你染細胞質的綠色染料應該用激發波長345nm的近紫外光去激發,選擇吸收波長530nm的濾色鏡去觀察綠色熒光。

4、你需要確認一下你所使用的熒光激發塊,一般熒光激發塊有窄帶和寬帶兩種。
1)如果你使用的近紫外激發塊是寬帶的,你在顯微鏡下應該可以同時看到藍色的細胞核和綠色的細胞質!如果只有綠色細胞質,可能是你的激發塊選錯了,你可能選擇了藍光激發,所以只能看見綠色的細胞質。
2)如果你使用的近紫外激發塊是窄帶的,則你將只能看到藍色或綠色中的一種,看你選什么波長激發了。

解決顯微鏡放大400倍才能發現細胞污染問題

那種做布朗運動的小黑點是產堿桿菌,感染后致細胞生長緩慢。一般在實驗條件不嚴格的情況下,培養的細菌都會感染,在高倍顯微鏡下可見。其實在低倍下盯著細胞之間培基看也能看見小黑點。

其實在100×的倍數(甚至相差顯微鏡觀察40×)下就可以發現了,特別是在姨酶消化后,感覺和細胞混雜在一塊,特別臟,現在拿他們也沒有辦法了,

總結了兩點:
1)有條件的把細胞扔掉,但不排除重新購買的細胞仍然有;還有就是沒條件的不要管它,
2)我覺得一般的實驗所收影響不是很大。據說用四環素可以殺滅焦蟲

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