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普通熒光顯微鏡下怎樣觀測EGFP?




來源:責(zé)任編輯:yiyi
時(shí)間:2011-6-3 9:55:36

普通熒光顯微鏡下怎樣觀測EGFP? 
有的實(shí)驗(yàn)室可能只有普通的熒光顯微鏡,沒有倒置的,那么怎樣利用普通熒光顯微鏡也可以觀測EGFP的基因轉(zhuǎn)染入HepG2細(xì)胞呢?

     1)可以考慮載體表達(dá)完畢后(一般是轉(zhuǎn)染結(jié)束后24-72小時(shí)),將細(xì)胞固定,染色之,并加蓋封片劑,在細(xì)胞頂面加上蓋玻片制成可長期保存的細(xì)胞樣本。
         這樣即可用于正置熒光顯微鏡的觀察。且蓋玻片厚度小,甚至可以用工作距離很小的物鏡(如100x oil)進(jìn)行觀察。

      推薦大家使用35mm培養(yǎng)皿,比較容易操作。在制片的時(shí)候還可以吧皿壁完全去除,這樣就能同時(shí)滿足正置、倒置顯微鏡的觀察需要。
    2)還有一種比較快捷的辦法,只要將片子用PBS洗三遍,然后粘在載玻片上,上面用50%PBS+50%甘油封片,就可以了,在熒光顯微鏡下激發(fā)可看,記得不要調(diào)錯(cuò)激發(fā)光

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